第116章 日常生活——不停地实验(1/2)
下午的实验聚焦“吐温-20浓度优化”,这是绘制“极端重力-耐药基因表达”图谱的关键前置实验。
此前采用0.5%吐温-20浓度时,虽能将1.0G重力环境下的微生物裂解率提升至82%,
但昨日实验中,温楚莹通过微生物成像系统观察到,
该浓度导致31%的微生物细胞壁破裂过度,产生的细胞碎片使基因提取纯度从95%降至81%,严重影响后续检测准确性。
她立即停止常规实验,将问题整理成加密报告:
“1.0G重力条件下,0.5%吐温-20浓度导致微生物细胞壁过度裂解,
细胞碎片干扰基因提取,需通过浓度梯度实验优化,
建议设置0.3%、0.4%、0.5%、0.6%四组变量,同步监测细胞壁完整性与裂解效率相关性”,
通过内部加密系统发送给孙教授。
仅28分钟后,孙教授的回复传来:
“同意方案,补充要求:每组设置6个平行样本,采用方差分析验证数据可靠性,
同步用成像系统记录细胞形态学参数(细胞壁厚度、完整性评分、碎片粒径分布)”。
当孙教授抵达核心实验区时,温楚莹已完成实验准备:
四组不同浓度的吐温-20溶液均按无菌操作配制完毕,标注加密编号“TW-0.3-01至TW-0.6-06”;
1.0G重力模拟样本经解冻、稀释后,已分装至24个无菌离心管,每管样本量精准控制在200μL,
误差≤±1μL;微生物成像系统已完成校准,放大倍数设定为400倍,焦距校准误差≤0.01μ。
两人身着二级防护服,隔着无菌操作台默契配合。
孙教授负责吐温-20溶液的最终浓度复核:
用紫外分光光度计检测各组吸光度,
确认0.3%组吸光度为0.124、
0.4%组为0.165、
0.5%组为0.207、
0.6%组为0.249,
与理论值偏差≤±0.003,符合实验要求后,逐一标注“复核合格”。
温楚莹则专注于样本处理:
按“样本管编号对应吐温-20浓度组”的原则,用经校准的移液器精准加入20μL对应浓度溶液,
每加完一组就用酒精棉片擦拭移液器枪头座,避免交叉污染;
将加样后的离心管放入恒温振荡仪,设置振荡频率180rp、温度25.0℃、时间15分钟,
振荡结束后立即转移至微生物成像系统样本台。
“楚莹,重点记录细胞壁完整性评分(1-5分,5分为完整)和裂解效率,
每10分钟采集一次图像数据。”
孙教授一边整理实验记录,一边提醒,
“注意成像系统的光源强度稳定在1200x,避免光照差异影响形态观察。”
“明白。”温楚莹调整成像系统参数,屏幕上清晰呈现出各组微生物形态:
0.3%浓度组中,微生物细胞壁完整性评分为4.2分,裂解效率仅68%,内部核酸物质未充分释放;
0.6%浓度组中,细胞壁完整性评分降至2.1分,裂解效率虽达91%,但细胞碎片粒径集中在0.1-0.3μ,占比达42%,易导致基因提取时的柱堵塞;
当浓度调整为0.4%时,细胞壁完整性评分为3.5分,裂解效率85%,细胞碎片占比仅12%,且碎片粒径≥0.5μ,可通过后续离心步骤有效去除。
“就定0.4%!”孙教授凑过来看成像数据报表,指尖点在统计栏,
“这个浓度下,裂解效率与基因提取纯度达到最优平衡,符合后续检测要求。”
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