第一百零三章 问题可能出在样本采集时间上（1/2）

第二天一早，温楚莹拿着图表冲进会议室。

“教授、张老师、师姐，我发现问题可能出在样本采集时间上！”

她把图表摊在桌上，

“你们看，下午2点采集的样本，环境温度2℃左右，Ct值波动最小；

上午10点温度-2℃，Ct值普遍偏高，而且波动大。

我怀疑低温会抑制耐药基因的表达，导致检测时扩增效率不稳定。”

张老师凑过来看，手指点在图表上：

“这个规律……有点像我之前看过的一篇文献，

里面提到极端环境微生物有‘温度适应性表达’特性，低于0℃时，耐药基因的启动子活性会下降50%。

我当时觉得和咱们的样本关联不大，就没提。”

王教授的眼睛亮了：

“那咱们就做验证实验！今天分三个时间点采集：上午10点、下午2点、下午4点，

每个时间点采3份样本，统一在4℃条件下保存，然后同时检测，看数据差异。”

采集团队按照安排行动，下午五点，样本准时送到实验室。

温楚莹和李师姐立刻开始处理——统一离心10分钟，加5%甘油保存，然后同时加载到三台PCR仪上。

等待结果的四十分钟里，没人说话，大家都盯着仪器屏幕，连王教授都时不时看一眼手表。

“出来了！”李师姐先喊出声。

屏幕上，下午2点采集的样本Ct值分别是28.5、28.7、28.6，波动只有0.1；

下午4点的是29.2、29.4、29.3，波动0.1；

而上午10点的是32.1、32.5、32.3，波动0.4，且整体Ct值偏高。

“真的是采集时间的问题！”张老师激动地拍了下桌子，“楚莹，你立大功了！”

可温楚莹却没立刻松气：

“但上午的样本Ct值还是偏高，要是采集团队遇到特殊情况，只能上午采集怎么办？咱们得想办法让上午的样本也能稳定检测。”

王教授点头：“说得对。张老师，你查文献看看有没有能激活低温下耐药基因表达的试剂；

楚莹，你试试在样本处理时加入不同浓度的诱导剂，比如IPTG，看看能不能改善；

李黎，你负责优化样本保存的温度梯度。”

接下来的两天，团队又进入新的攻坚。

温楚莹测试了0.1ol/L、0.2ol/L、0.3ol/L三种浓度的IPTG，

结果0.2ol/L时，上午样本的Ct值降到了29.5左右，波动0.3，接近下午样本的水平。

可新的问题又出现了——加入IPTG后，样本的非特异性扩增增加，出现了杂峰。

“怎么办？杂峰要是不消除，会影响结果判断。”李师姐看着屏幕上的杂峰，皱起眉。

温楚莹盯着杂峰的位置，突然想起在学校做竞赛时，林导师教过的“引物特异性优化法”：

“咱们调整一下引物的退火温度，之前用的是58℃，试试59℃和60℃，看看杂峰会不会消失。”

她做了三个温度梯度的实验，当退火温度升到59.5℃时，杂峰果然消失了，Ct值稳定在29.3±0.2。

“成功了！”她忍不住欢呼，小初砚在意识里放起了虚拟烟花：“宿主太棒啦！终于解决了！”

解决了采集时间的问题，团队开始优化检测效率。

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